遺傳毒性試驗(yàn)

一、簡(jiǎn)介

遺傳毒性試驗(yàn)是指用于檢測(cè)通過(guò)不同機(jī)制直接或間接誘導(dǎo)遺傳學(xué)損傷的受試物的體外和體內(nèi)試驗(yàn)，這些試驗(yàn)?zāi)軝z測(cè)出DNA 損傷及其損傷的固定。

遺傳毒性試驗(yàn)主要用于致癌性預(yù)測(cè)，遺傳毒性試驗(yàn)結(jié)果可能對(duì)致癌性試驗(yàn)的結(jié)果分析有重要作用。因此，在藥物開(kāi)發(fā)的過(guò)程中，遺傳毒性試驗(yàn)的目的是通過(guò)一系列試驗(yàn)來(lái)預(yù)測(cè)受試物是否有遺傳毒性，在降低臨床試驗(yàn)受試者和藥品上市后使用人群的用藥風(fēng)險(xiǎn)方面發(fā)揮重要作用。

隨著其不斷改進(jìn)和更新，遺傳毒性試驗(yàn)在食品、藥物、環(huán)境等各領(lǐng)域安全檢測(cè)及評(píng)價(jià)上得到了廣泛應(yīng)用。

二、試驗(yàn)方法 

遺傳毒性試驗(yàn)常用的方法是采用不同檢測(cè)機(jī)理的遺傳毒性試驗(yàn)的組合，即體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)相結(jié)合、原核細(xì)胞與真核細(xì)胞相結(jié)合、不同試驗(yàn)終點(diǎn)相結(jié)合，從而提高了檢測(cè)具有遺傳毒性藥物的能力。

活性篩選：Mini-Ames、微核檢測(cè)；

體外：Ames assay、細(xì)胞或人淋巴細(xì)胞體外染色體畸變實(shí)驗(yàn)、小鼠L5178Y淋巴瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞體外微核實(shí)驗(yàn)；

體內(nèi)：嚙齒動(dòng)物（大鼠或小鼠）的骨髓微核實(shí)驗(yàn)。

推薦的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)組合包括：①一項(xiàng)細(xì)菌基因突變?cè)囼?yàn)；②一項(xiàng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體損傷細(xì)胞遺傳學(xué)評(píng)價(jià)或小鼠淋巴瘤tk檢測(cè)體外試驗(yàn)；③一項(xiàng)嚙齒類(lèi)動(dòng)物造血細(xì)胞染色體損傷試驗(yàn)。

2.1 試驗(yàn)動(dòng)物選擇

哺乳動(dòng)物體內(nèi)微核試驗(yàn)常采用小鼠和大鼠，如合適也可選用其他哺乳動(dòng)物。微核也可通過(guò)小鼠外周血中未成熟（如嗜多染）紅細(xì)胞或大鼠血液新生網(wǎng)織紅細(xì)胞測(cè)定。由于大鼠脾臟可清除血液中的微核化紅細(xì)胞，若采用大鼠外周血測(cè)定微核，需采用具有足夠靈敏度的檢測(cè)方法來(lái)測(cè)定新生網(wǎng)織紅細(xì)胞中的微核。

采用健康年輕性成熟動(dòng)物，嚙齒類(lèi)動(dòng)物給藥起始年齡建議為6～10 周齡。一般情況下雌性和雄性動(dòng)物微核反應(yīng)相似，故可采用一種性別動(dòng)物，如雄性。若性別間存在明顯的毒性或代謝方面的差異，則應(yīng)采用兩種性別的動(dòng)物，每組可分析的動(dòng)物數(shù)雌雄至少各 5 只。如果受試物擬專(zhuān)用于一種性別，可選用相應(yīng)性別的動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)。

起始試驗(yàn)時(shí)，動(dòng)物體重差異應(yīng)在各性別平均體重的 20%之內(nèi)。

2.2 給藥劑量設(shè)計(jì)

至少應(yīng)設(shè)置 3 個(gè)劑量組。

根據(jù)相關(guān)毒性試驗(yàn)或預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果確定高劑量，高劑量應(yīng)產(chǎn)生一定的毒性癥狀（如體重降低、造血系統(tǒng)細(xì)胞毒性）或骨髓毒性（如嗜多染紅細(xì)胞占紅細(xì)胞總數(shù)的比例降低超過(guò) 50%）。

2.3 給藥途徑選擇

一般情況下，給藥途徑應(yīng)與臨床擬用途徑一致。若不一致， 應(yīng)說(shuō)明理由。但是，為獲得全身暴露，在適當(dāng)時(shí)可進(jìn)行調(diào)整，如局部給藥的受試物。

三、觀察指標(biāo) 

結(jié)果中應(yīng)描述各劑量組的毒性大小，包括一般癥狀、死亡情況等，以及 PCE/（PCE+NCE）或 RET/（RET+NCE）的比例； 結(jié)果表示為嗜多染細(xì)胞微核率（MNPCE）或網(wǎng)織紅細(xì)胞微核率（MNRET）。

受試物至少一個(gè)劑量組微核率顯著升高，該增加在至少一個(gè)采樣點(diǎn)具有劑量依賴(lài)性，且在陰性對(duì)照歷史范圍之外，可判定為陽(yáng)性結(jié)果。

如果結(jié)果不是明確的陽(yáng)性或陰性，或者為了幫助確定結(jié)果的生物學(xué)意義（如弱的或邊緣性增加），應(yīng)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行專(zhuān)家同行評(píng)議和/或進(jìn)一步研究。有時(shí)候需要分析更多的細(xì)胞或者改變?cè)囼?yàn)條件進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。