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HE染色與常見問(wèn)題分析定義 蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,簡(jiǎn)稱HE染色法 ,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍(lán)色 ;伊紅為酸性染料,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法。 常見問(wèn)題 一.著色過(guò)深或者過(guò)淺 1.染色時(shí)間控制不佳,HE染色需要通過(guò)鏡檢來(lái)控制時(shí)間,可以先通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)得到最佳染色時(shí)間,一般情況下新鮮蘇木素染色時(shí)間在1-3min左右,分化時(shí)間同樣不易過(guò)長(zhǎng),過(guò)度分化可以水洗后重新復(fù)染蘇木素。
二.染色后切片不清晰,霧化,斑點(diǎn) 1.烤片溫度過(guò)低,時(shí)間不夠,導(dǎo)致脫蠟不徹底,切片留存白色斑點(diǎn), 2.染色后切片脫水時(shí)間不合理,切片上殘留水分,使切片霧化,需要優(yōu)化脫水的梯度乙醇時(shí)間,切片經(jīng)過(guò)低濃度時(shí)時(shí)間要短,向高濃度逐漸延長(zhǎng)脫水時(shí)間 3.蓋玻片上殘留封固劑,導(dǎo)致切片不清晰,需要重新封片解決 4. 組織標(biāo)本已發(fā)生自溶或取材后沒(méi)及時(shí)固定或固定液濃度不夠;另固定前干枯標(biāo)本,染色后易出現(xiàn)灰染現(xiàn)象,很難補(bǔ)救。 5. 固定劑對(duì)組織有一定媒染作用,它既可與蛋白結(jié)合又能與染料結(jié)合,可增強(qiáng)著色能力,同時(shí)能沉淀和凝固細(xì)胞內(nèi)成分,使細(xì)胞內(nèi)成分產(chǎn)生不同折光率造成光學(xué)差異。故固定不良是造成切片染色模糊不清的主要原因。 6. 在日常病理制片中淋巴結(jié)處理不當(dāng)造成切片染色后組織見發(fā)灰現(xiàn)象,其主要原因由于細(xì)胞密集,結(jié)構(gòu)復(fù)雜導(dǎo)致固定液難以滲透到組織深部,從而造成組織中央固定不佳,而出現(xiàn)徹底發(fā)灰現(xiàn)象�?捎玫攘繜o(wú)水乙醇乙醚混合液處理切片5-10分鐘,乙醇洗,水洗,3%硫酸鐵銨溶液補(bǔ)充媒染5分鐘既可。
三.染色后切片有黑色雜質(zhì),氣泡 1.雜質(zhì)多為蘇木素染色液中的金屬膜粘附于載玻片上,每天染色前仔細(xì)過(guò)濾蘇木素染液或者使用半氧化蘇木素染色液 2.染色后切片經(jīng)過(guò)梯度乙醇脫水不徹底,導(dǎo)致封片后載玻片上殘留水分,也可能是封片是出現(xiàn)的氣泡
四.染色后細(xì)胞核呈棕色 1.蘇木素染液過(guò)度氧化或者染色后返藍(lán)時(shí)間不足,染色前檢查蘇木素的染色能力并即時(shí)更換試劑,然后適當(dāng)延長(zhǎng)返藍(lán)時(shí)間
五.切片染色不勻 1. 組織取材固定不當(dāng),如組織取材過(guò)大或過(guò)厚,不能將組織完全固定,組織切片染色后出現(xiàn)外周固定好的部分易著色,而中間未固定好的組織 ,細(xì)胞著色模糊,使染色不均。在送檢的標(biāo)本中,及時(shí)用4%中性甲醛對(duì)標(biāo)本固定,固定液應(yīng)是標(biāo)本的4倍。大標(biāo)本應(yīng)切開固定。 2. 切片薄厚不均或有橫紋。切片刀有缺口時(shí),易造成斷裂,破碎和不完整。切片刀傾角過(guò)大上卷,不能連在一起,過(guò)小則切片皺起�;蛞蚵萁z松動(dòng)產(chǎn)生振動(dòng)切片易造成厚薄不均或技術(shù)人員手臂搖動(dòng)切片機(jī)頭力量不均易造成橫紋。切片時(shí)檢查切片機(jī)螺母是否擰緊。 3. 組織脫水,透明和浸蠟處理不當(dāng),組織脫水用的各級(jí)乙醇未能保證相應(yīng)濃度使組織脫水不徹底,二甲苯內(nèi)的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)組織易碎也無(wú)法切出好片子,浸蠟溫度過(guò)高,組織變脆也不利切片染色。 相關(guān)文章:HE染色報(bào)告 |