定義

蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡(jiǎn)稱HE染色法 ，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍(lán)色 ；伊紅為酸性染料，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法。

常見問(wèn)題

一.著色過(guò)深或者過(guò)淺

1.染色時(shí)間控制不佳，HE染色需要通過(guò)鏡檢來(lái)控制時(shí)間，可以先通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)得到最佳染色時(shí)間，一般情況下新鮮蘇木素染色時(shí)間在1-3min左右，分化時(shí)間同樣不易過(guò)長(zhǎng)，過(guò)度分化可以水洗后重新復(fù)染蘇木素。

二.染色后切片不清晰，霧化，斑點(diǎn)

1.烤片溫度過(guò)低，時(shí)間不夠，導(dǎo)致脫蠟不徹底，切片留存白色斑點(diǎn)，

2.染色后切片脫水時(shí)間不合理，切片上殘留水分，使切片霧化，需要優(yōu)化脫水的梯度乙醇時(shí)間，切片經(jīng)過(guò)低濃度時(shí)時(shí)間要短，向高濃度逐漸延長(zhǎng)脫水時(shí)間

3.蓋玻片上殘留封固劑，導(dǎo)致切片不清晰，需要重新封片解決

4. 組織標(biāo)本已發(fā)生自溶或取材后沒(méi)及時(shí)固定或固定液濃度不夠；另固定前干枯標(biāo)本，染色后易出現(xiàn)灰染現(xiàn)象，很難補(bǔ)救。

5. 固定劑對(duì)組織有一定媒染作用，它既可與蛋白結(jié)合又能與染料結(jié)合，可增強(qiáng)著色能力，同時(shí)能沉淀和凝固細(xì)胞內(nèi)成分，使細(xì)胞內(nèi)成分產(chǎn)生不同折光率造成光學(xué)差異。故固定不良是造成切片染色模糊不清的主要原因。

6. 在日常病理制片中淋巴結(jié)處理不當(dāng)造成切片染色后組織見發(fā)灰現(xiàn)象，其主要原因由于細(xì)胞密集，結(jié)構(gòu)復(fù)雜導(dǎo)致固定液難以滲透到組織深部，從而造成組織中央固定不佳，而出現(xiàn)徹底發(fā)灰現(xiàn)象�？捎玫攘繜o(wú)水乙醇乙醚混合液處理切片5-10分鐘，乙醇洗，水洗，3%硫酸鐵銨溶液補(bǔ)充媒染5分鐘既可。

三.染色后切片有黑色雜質(zhì)，氣泡

1.雜質(zhì)多為蘇木素染色液中的金屬膜粘附于載玻片上，每天染色前仔細(xì)過(guò)濾蘇木素染液或者使用半氧化蘇木素染色液

2.染色后切片經(jīng)過(guò)梯度乙醇脫水不徹底，導(dǎo)致封片后載玻片上殘留水分，也可能是封片是出現(xiàn)的氣泡

四.染色后細(xì)胞核呈棕色

1.蘇木素染液過(guò)度氧化或者染色后返藍(lán)時(shí)間不足，染色前檢查蘇木素的染色能力并即時(shí)更換試劑，然后適當(dāng)延長(zhǎng)返藍(lán)時(shí)間

五．切片染色不勻

1. 組織取材固定不當(dāng)，如組織取材過(guò)大或過(guò)厚，不能將組織完全固定，組織切片染色后出現(xiàn)外周固定好的部分易著色，而中間未固定好的組織 ，細(xì)胞著色模糊，使染色不均。在送檢的標(biāo)本中，及時(shí)用4%中性甲醛對(duì)標(biāo)本固定，固定液應(yīng)是標(biāo)本的4倍。大標(biāo)本應(yīng)切開固定。

2. 切片薄厚不均或有橫紋。切片刀有缺口時(shí)，易造成斷裂，破碎和不完整。切片刀傾角過(guò)大上卷，不能連在一起，過(guò)小則切片皺起�；蛞蚵萁z松動(dòng)產(chǎn)生振動(dòng)切片易造成厚薄不均或技術(shù)人員手臂搖動(dòng)切片機(jī)頭力量不均易造成橫紋。切片時(shí)檢查切片機(jī)螺母是否擰緊。

3. 組織脫水，透明和浸蠟處理不當(dāng)，組織脫水用的各級(jí)乙醇未能保證相應(yīng)濃度使組織脫水不徹底，二甲苯內(nèi)的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)組織易碎也無(wú)法切出好片子，浸蠟溫度過(guò)高，組織變脆也不利切片染色。

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